حيث تستخدم الخلية البكرتية الى نوعين من الانزيمات لحماية نفسها 1- انزيمات التحديد Restriction enzymes : حيث تقوم بتحديد اماكن معينة فى تتابع الدنا الغريب وقصه وتقطيعه الى اجزاء صغيرة لا يوجد اى ضرر منها Modifying enzymesانزيمات التعديل او التحوير -2 وهى التى تستخدم فى تحوير الدنا الخاص بالبكتريا نفسها وتغير من شكله حتى تميز بينه وبين الدنا الغريب . حيث تقوم باضافة مجموعة مثيلMethyl ( CH3 ) الى الاحماض النووية الخاصة بها عن طريق انزيم المسيليز Methylases فى عملية تسمى ( دام وديسم مثيليشين dam and dcm methylation ) . حيث تفوم البكتريا باضافة مجموعة مثيل Methyl الى قاعدة الادنينA والسيوتسين C (Methylation at an A or a C residue ) الموجودة فى الدنا البكتيرى . وبالتالى لا تستطيع انزيمات التحديد من الاقتراب من الدنا البكتيرى لانه محمى ومغطى بمجموعات المثيل . وبالتالى عندما يدخل اى حمض نووى غريب الى الخلية البكترية تقوم انزيمات القطع المحدد بتقطيعه ادا لم يكن محمى بوجود مجموعة المثيل على قواعده . ولكن تلك مشكلة هامة تقابلنا عندما وضع الجين الغريب الدى نريد نسخه ووضعنه داخل البكتريا .. حيث ستقوم أنزيمات البكتريا على الفور بتقطيع الجين وتدميره ،لدلك يجب علينا عند استخدام اى خلية بكترية فى النسخ ان نقوم بابطال نظام المثيل حتى لا تقوم بتقطيع الجين المراد نسخه انزيمات القطع المحدد Restriction enzyme وهى الانزيمات التى تستخدم كأداة من أدوات البيوتكنولوجى حيث تقوم بقطع الدنا فى مكان محدد وتسلسل معين يعرف باسم موقع القطع Restriction site أو موقع التعرف Recognition Sequence ، ويتم القطع بها على أمل ان الجين المراد دارسته يقع بجواره . ويتم معرفة دلك بالعديد من الابحاث والدارسات والكثير من التجارب المعملية . خصائص انزيمات القطع المحدد : Characteristics of Restriction enzyme 1- غالباً يتم عزلها من اتواع البكتريا المختلفة او فطر الخميرة . 2- يقطع الحمض النووى فى نقطة محددة اومكان وموقع قطع معين Recognition Sequence 3- تعمل كنظام مناعى مصغر للبكتريا يحميها من جزئيات الدنا الغريب مثل الاصابة الفيروسية . 4- انزيمات القطع اما تترك نهايات لاصقة او بشكل متعرج cohesive or sticky مثل الإنزيم القاطع إيكو أر واحد (Eco RI ) يقطع عندما يجد 6 من الأحماض النووية في هذا التسلسل( GAATTC). او نهايات تامة او حادة او بشكل رأسي مستقيمblunt مثل الإنزيم القاطع هبا1 (Hpa 1 ) يقطع عندما يجد 6 من الأحماض النووية في هذا التسلسل( GTTAAC). 5- مناطق القطع غالباً تكون متقابلة palindromic DNA sequences ( اى توجد منطقة القطع بنفس التتابع على شريطى الدنا العلوى والسفلى عكس بعض ) ومكونة من 4-8 زوج من القواعد 4-8 bp مثل الإنزيم القاطع إيكو أر واحد (Eco RI ) . - احتمالية القطع نظرياً عدد القواعد الناتجة عند استخدام انزيم معين تنتج من القانون P=(1/4) n حيث P تعنى عدد القواعد المحتمل ظهورها Cutting Probability و 4 تمثل عدد حروف اللغة الجينية وهى قواعد النتروجين الاربعة و n تمثل عدد القواعد المعينة الخاصة بكل انزيم التى يتعرف عليها ويقطع عندها الجين . مثال : فى جزئ الدنا المكون من الف قاعدة مزدوجة .. ما عدد مرات القطع فيه ادا استخدمنا انزيم إيكو أر واحد (Eco RI ) الدى منطقة القطع الخاصة Recognition Sequence به مكونة من 6 قواعد ..؟؟؟ الحل 1/4)^6=1/4096 p = ادن عدد مرات القطع = /4996 1000 = مرتان والقطع الناتجة = قطعتان ملحوظة هامة : عدد القطع يختلف ادا كان الجين دائرى عما ادا كان عبارة عن شريط مستقيم ادا كان الشريط دائرى فان عدد القطع يساوى نفس العدد الناتج من القانون اما ادا كان الشريط مستقيم فاننا نزيد واحد نتيجة تبقى طرف كما هو بالرس